DNA提取的注意事項(xiàng)
1、 裂解液要預(yù)熱,以抑制DNase,加速蛋白變性,促進(jìn)DNA溶解。
2、 酚一定要堿平衡。苯酚具有高度腐蝕性，飛濺到皮膚、粘膜和眼睛會(huì)造成損傷，因此應(yīng)注意防護(hù)。氯仿易燃、易爆、易揮發(fā)，具有神經(jīng)毒作用，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。5 m: d! o8 g% {3 ^* \
3、 各操作步驟要輕柔,盡量減少DNA的人為降解。
4、 取各上清時(shí),不應(yīng)貪多,以防非核酸類成分干擾。
5、 異丙醇,乙醇.NaAc,KAc等要預(yù)冷,以減少DNA的降解,促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
6、 提取DNA過(guò)程中所用到的試劑和器材要通過(guò)高壓烤干等辦法進(jìn)行無(wú)核酸酶化處理。
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
8、 用大口滴管或吸頭操作，以盡量減少打斷DNA的可能性。* @0 K2 `* m7 S
9、 要用新鮮樣品或液氮冷凍-70度保存的樣品。這樣通過(guò)降低內(nèi)切酶的活性DNA的降解。/ I1 U6 y5 m$ F' h! W8 f' b
10、 避免劇烈吸打DNA，不能攪動(dòng)基因組DNA。4 P9 o1 q( F j, A7 Z' {4 k+ f
11、 吸取基因組DNA時(shí)，要用專用的粗口吸頭，普通吸頭可能會(huì)切斷DNA或造成DNA缺口。% c# `% F+ R* A2 Z- g
12、 基因組應(yīng)4度保存，如-20度保存可能導(dǎo)致DNA斷裂。. C3 n* p6 ]& a7 T& G7 Z# \
13、 在準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，應(yīng)將DNA樣品放在碎冰上。! |: A4 s0 ?, l: _: W1 D- g* D
14、 用Tris緩沖液溶解DNA。5 O; i" O. q" [
15、 加緩沖液后，為了加速DNA溶解，可以輕輕晃動(dòng)或輕彈試管。
16、 加入緩沖液后，置于4度過(guò)夜，也可以溶解DNA。7 }& {2 m( P1 W. y
17、 將DNA溶液65度溫育10分鐘，可以滅活DNase。
18、 在抽提過(guò)程中如果水相和有機(jī)層的界面不太清楚，說(shuō)明其中蛋白質(zhì)含量較高，可增加酚/氯仿抽提的次數(shù)或適當(dāng)延長(zhǎng)離心的時(shí)間。& w# d( o" C9 R# m9 F
19、 酚抽提時(shí)如果上清液太粘稠，無(wú)法進(jìn)行水相轉(zhuǎn)移時(shí)，可加入適量TES稀釋后再抽提
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