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登革熱IgG酶聯(lián)（ELISA）免疫吸附試驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間：2014-3-8 9:14:19??????瀏覽次數(shù)：
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)單份和/或雙份血清IgG 抗體

試驗(yàn)材料：
（1）抗原：
陽(yáng)性抗原：采用C6/36 細(xì)胞感染登革病毒培養(yǎng)物為陽(yáng)性抗原。
陰性抗原：未接種病毒的正常C6/36 細(xì)胞為陰性抗原對(duì)照。
（2）辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG 抗體；
（3）緩沖液：
包被液：pH9. 6 碳酸緩沖液；
稀釋液：pH7.4 PBS（含5%脫脂奶）
洗滌液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐溫－20）；
（4）顯色液：A/B 液
（5）終止液：4N H2SO4
（6）酶標(biāo)板、酶標(biāo)儀。
檢測(cè)步驟：
（1）用包被液按工作濃度稀釋抗原，100μl/孔，4℃過(guò)夜；
（2）棄去包被液，用PBS-T 重復(fù)洗滌3～5 次，甩干；
（3）將待檢血清用稀釋液從1：100 開始作2 或4 倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，
100μl/孔，同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照，37℃水浴1 小時(shí)；
（4）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6 次；
（5）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1 小時(shí)；
（6）棄去酶標(biāo)抗體，用洗滌液洗滌6 次，甩干；
（7）加顯色液：于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分鐘；
（8）加終止液于每反應(yīng)孔，100μl /孔。
結(jié)果判斷：
于450nm（TMB）陽(yáng)性對(duì)照孔OD 值/陰性對(duì)照孔OD 值，即P/N≥2.1，對(duì)照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對(duì)照孔OD 比值≥2.1，則標(biāo)本為登革熱IgG 抗體
陽(yáng)性，反之陰性。（陰性對(duì)照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實(shí)際
數(shù)值計(jì)算）
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意義：
陽(yáng)性結(jié)果，表明曾受到DV 感染，>1：100 有診斷參考意義；
恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4 倍或4 倍以上升高則可確診。